所有的荧光体发光广泛和一些也可以同时兴奋由多个激光流式细胞分析仪仪器。发射光的一部分,因此从一个标记可以达到几个探测器用于其他标记在你的面板(图1)。这种溢出效应是累积的所有染色荧光团的协议,增加了背景信号(噪声),甚至可以创建独特的假阳性的数量。

准确的流式细胞术分析取决于(数学)消除溢出信号从原始数据和过程称为补偿(图2)。不幸的是补偿只能正确的平均信号电平,不增加噪声,因此负面人口往往显示更高的数据在多色比无污点的或单一的彩色控制面板。这可以使它更难以正确识别昏暗的数量(见也FMO控制)。

溢出的量必须通过运行单染色实验测量控制单独为每个荧光团。每个控件必须包括只有一个荧光团(如可行性染料都需要自己的单染色控制),必须有一个明确的正面和负面的人口的标志(一个单独的清白的示例可能有时用作多个标记)“普遍消极”。值得注意的是溢出的程度和后续的补偿是乐器的特性和荧光团,和正在运行的实际样本是独立的。

在这种情况下,细胞没有明显的积极的人口(罕见的事件或低表达水平)或样本的数量限制(例如活检)“补偿”或“抗体捕捉”可以使用珠子而不是生物样品单染色控制运行。这些珠子结合抗体通过他们不断地区(轻链或Fc部分)和通用试剂产生强烈的积极信号为每个标记。

附加信息:

• Bio-Rad流式细胞术基础指南:荧光补偿
• 详细的解释薪酬由马里奥博士的代名词(NIH疫苗中心)
• 血细胞计数教程:调整PMT电压对溢出的影响和补偿

图1。溢出的FITC PE探测器发射光。~ 10%的发射光FITC的PE探测器都是在蓝色激光线。产生的流动数据必须使用补偿纠正(或情况可以避免在第一时间通过移动PE黄绿色激光线)。

图2。FITC单染色前后控制补偿。平均薪酬的溢出FITC PE信号的发射光。注意,补偿不改变现有数据传播但可以使它更可见向下将人口规模一个日志。