流式细胞仪利用荧光标记抗体绑定和识别特定细胞的子集。绑定依赖于独特的变量的特异性区域每个抗体的克隆。相反,它是常见的Fc抗体分子的一部分,与大量的免疫细胞(如B淋巴细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞,NKs,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,人类血小板,肥大细胞和嗜碱粒细胞)负责在活的有机体内观察到的效应函数。这些细胞表达各种各样的Fc受体表面,因此可以产生背景,甚至增加假阳性信号在流式细胞术分析。单核细胞和巨噬细胞在这方面尤其臭名昭著的(图1)。

可以避免不必要的抗体绑定Fc受体通过重组抗体检测(例如Fab片段,REAfinity™抗体),或更常见的,染色之前被浸透的受体的细胞标记抗体。保持饱和的受体阻滞剂是抗体孵化期间留在的地方。潜在的阻止试剂包括1)特定anti-Fc受体抗体,2)纯化免疫球蛋白过剩,3)过剩(unpurified)形式的成人血清免疫球蛋白。注意胎牛血清通常包含在染色缓冲食谱免疫球蛋白含量也低,不会阻止Fc受体。

同形像控制(与不相关的特异性标记抗体)可以用来评估Fc阻碍协议的有效性。同形像的使用控制用于控制目的,然而,不推荐。

附加信息:

• 罗萨莱斯(2017)Fcγ受体异质性在白细胞功能响应。前面。Immunol,doi: 10.3389 / fimmu.2017.00280
• 安徒生et al。(2016)消除错误导致流式细胞术引起的抗体绑定Fc受体人类单核细胞和巨噬细胞。血细胞计数一次。89:1001 - 1009,doi: 10.1002 / cyto.a.22995