Dye-mediated绑定
非特定的抗体结合非目标细胞(和塑料表面)通常最小化通过包括多余的不相关的蛋白质染色(BSA或稀释血清)的缓冲区。此外,特定的阻塞试剂染色之前可以使用消除与Fc受体抗体绑定。不幸的是,这两个策略有效地消除dye-mediated不具体的绑定。这种类型的背景染色出现在两种主要形式:1)花青染料结合单核细胞/巨噬细胞,和2)高分子染料相互作用。
花青染料
一些传统的串联与花青染料受体(如PE-Cy5 PE-Cy7、PerCP-Cy5.5 APC-Cy7)显示非特定的绑定单核细胞和巨噬细胞。然而,类似的单核细胞绑定也被观察到non-cyanine染料PE / Dazzle594所以的确切机制了解甚少虽然Fcγ1高亲和力受体(CD64)通常是作为目标。许多供应商出售自己的专有染色缓冲区来消除这种类型的非特定的绑定(图1)。
高分子染料
第二种类型的dye-mediated绑定还涉及到一个特定群体(主要是串联)染料,但独立于染色的细胞,即它是由于dye-dye染料不同聚合物之间的相互作用(BD地平线出色™和超级明亮)。再一次,有多个专有缓冲区商用消除染色工件(图2)。
附加信息:
- Jahrsdorfer et al。(2005) Phosphorothyoate oligodeoxynucleotides块Cy5共轭,单核细胞的非特异性结合。J Immunol方法297:259 - 263,doi: 10.1016 / j.jim.2004.11.023
- 才华横溢的污点缓冲技术数据表,https://www.bdbiosciences.com/content/bdb/paths/generate-tds-document.us.563794.pdf
- 超级明亮染色缓冲手册,http://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/SuperBrightStainingBuffer.pdf
图1所示。True-Stain单核细胞阻断剂™治疗(红色)消除未指明的PE-Cy5绑定(黑)人类PBMCs CD14的积极部分。
图2所示。BD地平线™的污点缓冲消除BV605之间的非特定的绑定和BV421高分子染料。虚线添加到想象中CD4阳性淋巴细胞的影响。
