除非你是专门研究细胞凋亡和细胞死亡,你应该只包括健康可行的细胞流分析和细胞分选实验因为死亡和垂死的细胞经常显示:

• 增加非特异性抗体绑定
• 增加自体荧光
• 表型改变/抗原表位
• 妥协RNA / DNA的质量和下游应用程序中的扩散能力

单纯依赖向前边撒识别健康细胞不是很准确。此外,有各种各样的商业化可行性染料选择所以很容易甚至融入复杂的多色板。

最常见的特异性生存染料是基于细胞膜的完整性。健康细胞排除染料和染色只有弱,而死亡或死亡的细胞有漏水的膜和染料渗透的细胞引起高强度染色。注意,细胞碎片可能保持清白的,因此它可能有时是有用的(也)活细胞染色。是很重要的用滴定法测量你的生存能力染料,就像你的抗体。

可行性染料有三种口味:

• 细胞impermeant DNA结合染料-污渍死细胞(使用简单但不能结合固定或细胞内染色)
• 细胞渗透的酶底物活细胞染色(使用简单但不能结合固定或细胞内染色)
• 细胞impermeant我的活性染料——污渍死细胞(染色协议可能需要额外的步骤,但可以结合细胞内染色和修复/烫协议)

附加信息:

1. Fisher热:BestProtocols:可行性染色流式细胞术的协议
2. Fisher热:细胞流式细胞术的可行性分析

图1所示。细胞被分离出小鼠脾脏和多个淋巴细胞染色标记以及可行性。生活和死亡(CD45 + CD3 +) T细胞不能分开单独基于散射。

图2所示。虚高的CD4细胞计数由于坏死细胞非特异性抗体结合。准确的流分析需要排除的死细胞。